NCI-H596 人肺腺鳞癌细胞

产品编号：CL-649h

细胞特性

含量：>1x106cells；

生长特性：贴壁生长；

细胞形态：上皮细胞样，长梭形，不规则形；

规格：T25瓶或者2mL冻存管包装；

用途：仅供科研使用。

细胞运输、保存及注意事项

 培养条件

细胞复苏、传代、冻存操作

一、细胞复苏：

   ①冻存管从液氮或-80℃冰箱中取出放入PE手套中，迅速没入37℃水浴锅，摇晃冻存管加速溶解，以1min内全部溶解为宜；

   ②在超净台中将溶解好的细胞液加入到装有9mL完全培养基的离心管内，1000-1200rpm离心5min，弃去上清液，用1-2mL完全培养基重悬细胞；

   ③将细胞悬液加入到含有5-6mL完全培养基的T25瓶中，放入培养箱培养。

二、细胞传代：

   ①将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入1-2mL胰酶（0.25%Trypsin+0.02%EDTA）；

   ②镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（可用吸管吸起些许胰酶轻轻吹打细胞层某处，肉眼可见细胞层脱落，即消化完成，否则继续消化），直接吸掉胰酶，加入5-6mL完全培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散；

  ③将细胞悬液按1:2比例分到新的T25瓶中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养；

   ④注意培养基pH值变化和细胞密度，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%-90%时，重复传代操作或者冻存。

三、细胞冻存:

收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例：

  ①细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.

  ②1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

  ③将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

注意事项：

  ①所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

  ②建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。